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动物骨髓单个核细baofen离ye实验方法

 

技术文档编hao:TBD0024SOP

 

【金世豪娱乐下载规ge】

 

200ml/Kit

 

【金世豪娱乐下载组成】

 

为方便广大用户使用,试剂narong如下:

 

 

名称

金世豪娱乐下载编hao

规ge

 

 

 

 

A

XXXX 动物骨髓单个核细baofen离ye

 

200ml

 

 

 

 

B

样本xi释ye(赠pin)

2010C1119

200ml

 

 

 

 

C

清洗ye(赠pin)

2010X1118

200ml

 

 

 

 

D

匀浆chong洗ye(赠pin)

F2013TBD

200ml

E

说ming书

 

1

 

 

 

 

 

【实验前准备】

 

1.       适用仪器

 

*大离心li可达 1200g 的水ping转子离心机

 

2.       无菌硅化离心管

 

序hao

金世豪娱乐下载名称

金世豪娱乐下载huohao

规ge

 

 

 

 

1

无菌硅化离心管/10ml(随试剂盒附赠 5 zhi)

TUB2015

100 zhi/

 

【骨髓单细bao悬ye的zhi备】

 

1.       yi适当方式chu死动物,剥离出股筿iang騤ing骨,用剪刀剪断骨头两duan,露出naqiang。

 

2.       用注射器吸qu适liang(根据动物大小)的匀浆chong洗ye(金世豪娱乐下载编hao:F2013TBD)chong洗出naqiang中的骨髓。

 

3.       收集悬ye到合适离心管中,反复吹打成单细bao悬ye,yi 70?m 细bao筛网(金世豪娱乐下载编hao:TBDTM-SC,随试剂盒附赠 5 个)过滤。

 

4.       450g,离心 10min,弃上清。

 

5.       用样本xi释ye(金世豪娱乐下载编hao:2010C1119)zhong悬细baonong度为 2×108–1×109/ml 的单细bao悬ye

 

备用(yi小shu为li,一般使用 1ml 样本xi释yezhong悬骨髓细bao)。

 

【检验方法】

 

全过程样本、试剂ji实验环境均xu在 20±2的条件下jin行。

 

 

1.       qu一zhi适当离心管,加入与骨髓单细bao悬ye等liang的fen离ye(注:fen离ye*少不得少yu

 

3ml)。

 

2.       用吸管小心吸qu骨髓单细bao悬ye加yufen离yeye面上,400-500g,离心 20-30min。(注:根据骨髓单细bao悬yeliangque定离心条件,骨髓单细bao悬yeliang越大,离心li越大,离心时间越长,具ti离心条件xuke户自行mo索,yi达到*佳fen离效果)。

 

3.       离心后,此时离心管中由蓌ian料耭en为四层。**层为xi释ye层。dier层为环状乳白色单个核细bao层。di三层为透mingfen离ye层。di四层为红细bao层。

 

4.       用吸管小心吸qudier层环状乳白色单个核细bao层到另一 15ml 离心管中,向离心管中加入 10ml 清洗ye(金世豪娱乐下载编hao:2010X1118),混匀细bao。

 

5.       250g,离心 10min

 

6.       弃上清。

 

7.       用吸管yi 5ml 清洗ye(金世豪娱乐下载编hao:2010X1118)zhong悬所得细bao。

 

8.       250g,离心 10min

 

9.       zhong复 789,弃上清后yi 0.5ml 后续实验所xu相应yetizhong悬细bao。

 

fen离图li

 

 

 【注意事项】

 

1.    全过程样本、试剂ji实验环境均xu在 20±2的条件下jin行。为获得*佳的实验结果,*好在qu样 2h najin行实验,样pin存放时间越长,细baofen离效果越差。样pin放置超过 6h 后fen离效果更差甚至不能达到fen离mu的。

 

2.    本实验*好不要使用gao聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料zhipin,应使用无静电、di静电心管jiwei经碱chu理过后的玻璃zhipin,yin为静电zuo用jiang导致细bao贴壁、碱chu理的玻璃表面会变成毛面,影响细baofen离效果。

      3.    吸qu过duo的单个核细bao层jifen离ye层会导致fen离yejiao界chu的li细baobei吸出从而使混杂的li细bao数liang增加。

       4.    fen离ye用liang大yu骨髓单细bao悬ye样本时,fen离效果更佳。

       5.    如实验后细bao得率或活性过di,请lian系tian津灏yang技术zhi持yi寻求帮助,具tilian系方式详见下方shengchanqi业信息。

  【储存条件ji有效期】

 

    changwen保存,有效期 2 年。本pinyi感染**,xu无菌条件操zuo。无菌条件下操zuo,启封后置changwen保存。如 4保存,本fen离yeyi出xian白色结jing,影响fen离效果。

 

【参考值(参考范围)】

 

   本实验单个核细bao提qu率ji纯度大yu 80%

 

【相关实验技术方案】

 

1.       骨髓chong洗单细bao悬yezhi备技术。

 

2.       所获得单个核细bao的培养技术。

 

3.       所获得单个核细bao的核酸提qu技术。

 

4.       所获得单个核细bao的jian定方法A.流式细bao技术B.**组化技术

 

C.yuan位杂jiao技术

 

D.PCR 技术

 

【可能存在的问题jijie决方法】

 

1.       由yu血ye粘秖u⑾竍ao密度等差异可能zao成的问题jijie决方案如下表所shi:

 

出xian情况

出xianyuanyin

 

建yijie决方案

 

 

 

 

 

离心后mu的细bao存在yu血浆层或xi释ye层

转速过小或离心时间过短

适当增减转速

 

 

 

 

 

离心后mu的细bao存在yufen离ye中

转速过大或离心时间过长

 

 

 

 

 

 

 

 

离心后白环层弥san

细bao密度过大

 

调整细bao密度

 

 

 

 

 

离心后白环层太浅或看不见

细bao密度过小

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2.       本fen离yefen离细bao的yuan理为密度梯度离心,其密度与wen秖u⒋笃沟让芮邢喙亍2煌豵uke户可根据当地情况对离心条件jin行适当调整。建yi对离心条件jin行调整时,恒定离心时间,对离心转速jin行调整。

 

3.       本fen离ye依zhaoguo际标准,全部使用药用级yuan料,性能zhi标与guochan同类金世豪娱乐下载略有不同,可能出xian红细baochen降不完全的情况,可yi适当加大离心转速。

 

注:在对离心条件jin行调整时,离心转速的加减yi 50-100g 为基数,直至达到*佳fen离效果,离心li*小不得小yu 400g,*大不得大yu 1200g。离心时间yi 20-30min 为准。