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密理博超滤离xin管的changjian问tiyu解答:

一:超滤离xin管的膜材謘hi鞘裁矗

      密理博超滤离xin管的膜材质为默克密理博特有的Ultracel再生纤wei素膜,生产工艺严ge,截留分zi量明que而精准,蛋bai吸附损失*小。

二:如果yao用超滤离xin管的方法分离liangzhong蛋bai,na么这liang个蛋bai的大小xuyao相差多少?

      按照经验,建议liang个蛋bai的分zi量yao相差一个shu量ji(10倍)

三:密理博超滤离xin管可以用yu病毒浓缩吗?

      可以。对yu慢病毒推jianAmicon Ultra  100KDa;对yu腺病毒推jianAmicon Ultra 50KDa。具体的caozuo步骤可以参考病毒浓缩纯化试剂盒FTLV00003和    FTAV00003的金世haoyulexiazai使用说明书。

四:密理博超滤装置是fu可以用yu高ya**?

      Amicon  Ultra都是cai用萹ue馍杓疲豢梢杂脃u高ya高温**。

wu:超滤离xin管可以用酒精****吗?

      Amicon  Ultrayu70%乙醇是jianrong的中,但是对**处理的具体方法没有做相guan的测试,所以无法提供geng进一瞛iang牟慰夹畔ⅰ

六:超滤离xin管han不hanRNA酶?

      不保证超滤离xin管不baohanRNA酶,建议用0.1%DEPCzai37度浸泡2小shi,以完全灭活RNA酶;can留的DEPC可以用Milli-Q超纯水洗涤除去。

七:用超滤离xin管去除去wu剂是有什么xuyao注yi的吗?

       去wu剂因其独特的性质,当浓度大yu临界微团浓度(Critical Micelle Concentration、CMC)shi,去wu剂分zi会聚ji形成微团而改变分zi构象,这有可neng会影响去wu剂的去除效果,具体的caozuo步骤请垂询默克密理博ji术支持。

八:蛋baizai浓缩shi出现了沉淀,如he改进?

       蛋bai浓缩过快或者过秗aoㄋ醵jia锌蒼eng引起蛋bai沉淀。建议蛋bai浓缩后的*终浓度不超过20mg/ml。对yu对浓缩速度敏感而rong易沉淀的蛋bai,建议的方法是1)离xinlijiang为推jian离xinli的30%-50%  2)改用截留分zi量geng大的超滤管(如原本选用10K,此shi可以选择30K) 3)zai浓缩过cheng中取出超滤管,用枪头反复吹吸几次后再继续浓缩。

九:浓缩后发现浓缩ye中没觴in康牡癰ai,可neng的原因觴in男

       首先,Amicon Ultra超滤管的蛋bai*di起始浓度为25ug/ml。请que保样本的起始浓度大yu这个浓度。其次,如果问ti仍然出现,请不yao丢弃样本滤过ye以便用yu分析可neng的原因:

1)如果目的样本zai过滤ye中,na么请排查 :a)是fu选择了合shi截留分zi量的超滤管(目的蛋bai分zi量的1/2或者1/3) b)使用的离xinli是fuzai限ding范围内?如果使用的是rpm,请huan算成相应的g离xinli。c)离xin机*近是fu有校准过?d)是fu首次chang试这个蛋bai?如果nengque保用同样的超滤管对其它蛋bai成功caozuo的话,na么有可neng是这个目的蛋bai的原因。有shi蛋bai会因其本身的一些特性(构象差yi)而影响浓缩效果,建议选用上一分zi量ji别的超滤管(如原本选用30K,此shi可以选择10K)。

2)如果目的样本也不zai滤过ye中,na么:a)蛋bai样本起始浓度是fu大yu25ug/ml?b)用来queding样本浓度的方法是什么?是fu可信? c)目的蛋bai是不是沉淀了?如果是,具体解决方法请参考上面的guanyu蛋bai沉淀问ti的解释。

十:有shi候用超滤离xin管连水都离不xia来,可neng是什么原因?

       超滤离xin管超滤膜中han有微量gan油。如果出现这zhong情况,请先用0.1N NaOHqing洗再离xin。*后用缓冲ye或Milli-Q水再次qing洗后甩干。qing洗后的滤膜应立即使用,如zanshi不用,请保持run湿状态,避mian重新干zao。

十一:说明书推jianzai室温xia进行离xin,考虑礿iang癰ai的wending性,是fu可以zai4 摄氏度进行离xin?

        可以,但是di温会增jia蛋bai样品的粘性,导致流速jian慢,建议可将离xinshi间延changdao原来的1.5倍。

十二:如he对超滤离xin管进行去除内**的处理?

        提供的超滤离xin管是没有经过去内**处理的,同shi由yu内**tongchang以多聚体的形式存zai,大小zai10-1000KD之间不等,zai超滤的过cheng中是无法去除的。可以实验前tong过先用0.5M NaOH预qing洗,随后用Milli-Q水/缓冲yeqing洗的步骤去除大部分内**。guanyuzhen对Amicon Microcon Centriconchang试过的内**去除方案,请垂询默克密理博ji术专线。

十三:用浓缩后的蛋bai做xia游分析shi发现有干rao,可neng觴in男┰颍

          密理博超滤膜han有微量gan油。如果此成分干rao分析,可用缓冲ye或Milli-Q水预qing洗。如果干rao仍存zai,用0.1N NaOHqing洗,然后用缓冲ye或Milli-Q水再次qing洗后甩干。

十四:怀疑浓缩过cheng謝in康牡癰ai和超滤膜之间可neng存zaifei特yi性吸附,如he改善?

密理博超滤离xin管使用的是再生纤wei素膜,这zhong材謘hi堑癰ai吸附*di的超滤膜。但是对yu一些疏水性蛋bai或fei极性蛋bai,它们和膜的fei特yi吸附可neng会增强,对yu这zhong情况,可以chang试zai实验前对超滤管进行封闭处理,也可以chang试huan成Amicon Ultra0.5或2来进行实验,tong过jian小膜面ji来jiangdifei特yi性吸附。