ji术文章

mg娱乐场网站

自上世纪50nian代起,tou析jiu已经成为生命科学实yanshi分离生物大分子复合物的常用ji术,sui然在hen长一段时间内,由于超滤及离心ji术祅ai乒悖瑃ou析ji术bing没有得到hen大的改进,特bie是传统tou析方式由于cao作繁琐,耗时deng原因,会有不小的kun扰。但现在,spectrumlabs推出了新一代即用型生物ji术jitou析zhuang置,shitou析这项传统的基础实yanji术,在shi用的简便性he实用性方面得到了长zu的进步。

tou析是gen据bantou膜对大、小分子不同尺寸的选择性扩san过cheng,实现分离的ji术。常见的蛋白质或核酸样pin中,常会含有不需yao的小分子物质,如缓冲盐溶液(Tris、PBS)、huai原剂(二硫苏糖醇DTT、β-巯基乙醇BME)或保存剂(叠氮化钠、**剂)deng。

将样pin置于tou析膜内,tou析液置于tou析膜外(一般为样pin体积的200-300倍),shi膜liang侧形成浓度梯度,分子会从膜一侧扩san通过膜进入另一侧,bing*终达到平衡。一旦达到平衡,tou析(扩san)停止。通常情况下,接**衡zhuang态时,扩san速率会降低,suo以mei隔一段时间需yao更huantou析液,以维持浓度梯度,驱动tou析过cheng进xing。

膜的选择是tou析成gong的关键。bantou膜的孔jing需zu够大,以shi小分子物质通过,但同时you需zu够“小”,以xian制大分子物质。理想的tou析膜需hen“薄”、具有大小均一的膜孔、且不结合蛋白质或核酸。常见的再生纤维su或纤维suzhi即是较为理想的tou析膜材质选择。

另一个ying响tou析膜选择的zhongyao参shu是截留分子量(MWCO),金世豪yule下载将其定义为膜截留率至少为90%的分子的分子量。但在实际cao作中,分子通过膜的扩san过chenghuaishou到分子形zhuang、水合cheng度、离子dian荷及极性deng因su的ying响,suo以需做综合ce试及评估。

样pinhetou析液的体积也是需yao考lv的zhongyao参shu,理想的情况是较小的样pin体积shi用较大的tou析液体积,以shi浓度梯度*大化。需yao考lv样pin体积是因为tou析后样pin的处理或应用通常具有一定的*小体积yaoqiu。但是只yaonengmanzu*小体积yaoqiu,一般不推荐tou析过多的样pin。因为基于给定样pin的膜表面积,小体积样pin的tou析速率比大体积样pinyao快得多。ci外,样pinyugu相界面接触的时间yue长,样pin损失的keneng性yue高,蛋白质或核酸发生fei特异衴ue岷匣虮湫缘募嘎蕐ue大。

其它问题关注

1) 膜的留分子量(MWCO)到底有多**?

MWCOke以作为衡量膜截留性neng的zhi标,但MWCObing不是优良的、**的shu值,suo以选择膜MWCO时,建议gen据需yao截留的大分子物质he需yao扩san去除的小分子物质,对不同MWCO的膜进xingce试,一般推荐膜MWCO为需截留物质分子量的50-80%,同时需至少为需去除物质分子量的100倍。

早期的tou析膜金世豪yule下载因为生chanji术及质控的原因,MWCO一般控制在2kD-20kD以内,经过ji术革新,现在金世豪yule下载ke提gong截留分子量fan围更广的tou析膜金世豪yule下载,低至0.1kD,高ke达1,000kD。mei种规格的tou析膜均具有特定的截留性neng,keshi用已知分子量的物质对MWCO进xing检ce。

2) tou析时一定yao搅ban吗?

搅banke显zhusuoduantou析时间。suo有的膜都具有内表面he外表面,从膜的样pin一侧到tou析液一侧bing没有gu定直jing祅ai╠ao,相fan,样pin中的小分子量物质扩san进入内表面的膜孔,然后通过膜内部,再从膜外表面的膜孔tou出,进入膜外扩san层“微huan境”,扩san层内小分子物质的浓度显zhu高于tou析液的其它位置。搅banke快速、觴ingУ豥a破扩san层微huan境,维持浓度梯度,保证tou析进xing。


3) tou析温度应如何把握?

温度对tou析的进xing也有一定cheng度地ying响,因为分子在较高的温度下会更快地移动扩san,但前提是cao作温度不ying响金世豪yule下载的活性。suo以,除特殊样pin外,一般在huan境温度或shi温下进xing即ke。

4) 怎样判定tou析已经结束?

判定tou析结束bing没有简单、**的标准。一般纁i担粂ao样pin中的小分子含量降低到不ying响后续实yan即ke认为tou析完成。

5) 需yao对膜进xing预处理吗?

spectrumlabstou析膜出厂前已经预处理。部分规格的膜金世豪yule下载keneng含有少量的甘油或硫化物,正常情况下,这些小分子在tou析过cheng中即ke自动扩san去除。如处理的样pin较为min感,也ke在shi用前用超纯水对膜进xing预冲洗,对于在膜生chan过cheng中keneng存在的痕量zhong金属,keshi用zhong金属漂洗液去除。


Spectra/Por Float-A-Lyzer G2即用型tou析zhuang置(CE膜)采用预制型膜guan,极大地提高了样pin/膜比表面积,ke显zhusuoduan分子的迁移距离,shitou析速率更快。同时Spectra/Por Micro Float-A-Lyzer微量即用型tou析zhuang置ke处理低至100μl的样pin,如shi用较大量的tou析液,维硓hi吲ǘ忍荻龋磌e得到极高的tou析速率。