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ren富含 NK huoxing大颗粒**细胞(LGL)的纯化试剂he实验方法

 

【金shi豪yu乐下zaigui格】

 100ml/Kit

 【金shi豪yu乐下zaizu成】

 为方便guang大用户使用,试剂内容如下:

名称

金shi豪yu乐下zai编号

gui格

 A

 mi度梯度fenli液原液

 NK2011H-A

 100ml





 B

 梯度制备稀释液

 NK2011H-B

 100ml





 C

 说明shu

 

 1份






【实验前准备】 

 

适用仪器:*大li心力可达 1200g 的水ping转子li心机

 

【检验方法】

 

全过程样ben、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进xing。

 

1. 收集从外周血中fenli的单个核细胞(ren全血单个核细胞fenli襤ai餾hi豪yu乐下zai货号;LDS1075): 1×108 个悬yu 1ml wu血清培养基中。

2. 梯度fenlirong液制备,使用使用梯度制备稀释液参考下表将原液稀释至suo需浓度:







 原液浓度(%)

83% 

 79%

 73%

 70%

 66%







 bi重(g/ml)

 1.067

 1.064

 1.061

 1.058

 1.056

 

3. 梯度fenli层的制备:将梯度fenli液由高mi度至dimi度逐层加入至 10ml li心管(试管)内,每层约 1.2-1.5ml 加入hou应可jian明显的梯度界面,tong时biao记 70%层上部界面及 73% 底部界面位zhi。

 4. 上样:将单个核细胞单细胞悬液 1ml 加至梯度界面上。

 5. li心:400g,li心 20-25min。

 6. 取样:吸取 73% 70%rong液界面及上下两层fenlirong襤ai床街琰/span>biao记位zhi之间的rong襤ai?/span>

 

细胞jing洗涤hou供hou续试验。

 

注:样ben量加大时请ke户按选取对应耗材且按bili增加试剂用量,dan应注yi加入试剂及样ben

 

hou总体积bu超过li心管总体积的 2/3。

 

【注yishi项】

 

1. 实验全过程需在 20℃±2℃下进xing,否则ying响li心效果。

 

2. 由yu多层fenlirong液之间mi度差别bu大,因此li心机加速、jiang速时要慢,要pingwen。

3. 试剂瓶盖需盖紧,防止蒸发和污ran。

【储存条件及觴ing凇砍N卤4妫xing冱/span> 2 年。ben品yi感ran**,需wu菌条件操zuo。wu菌条件下操zuo,启封houzhi常温保存。如 4℃保存,benfenli液yichuxian白sejie晶,ying响fenli效果。