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离心guan是一ge简单的可以cheng受高转su压力的guan子,biru离一xie样pin,分离chushang清沉dian。超lv离心guan会有一ge类似于内guan和外guan的两ge部分,内guan中是带有一定分子量的膜,当高su离心时,分子量bi它xiao的jiulou到下面的guan子(ji外guan)中了,分子量bi它大的jiu截留在shang面(ji内guan中),jiu是超聅huo脑?常用于nong缩样pin。

超lv离心guan的分子量选择:
     按照样pin量和目标分子量选择适当的超lv离心guan,为羢huo玫?高的shou率,所选lv膜的截留分子量MWCO建议选择所需截留分子大xiao的1/3左右,bu超过目标分子量的一半。yin为超lv膜shang孔径是平均孔径,膜shang的孔并非均匀,离心高压下ye可能渗lou,yin此截留孔径yuexiao,流suyueman但截留bili更大。ru果样本nong度低体ji大,可选择较xiaorongji的超lvguanduo次zhong竎hun友胄摹u果同时需要脱盐和去除可溶xiao分子杂质,可将待nong缩样pin稀shi到超lvguan*大rongji再离心,zhong复2次可除去99%盐。避免过长时间huozhe过su离心,sui然高pin质的jinshi豪娱le下载都有防死端设ji,可避免过度离心zao成膜表面干erzao成bu可ni吸附。避免过度nong缩,*终体jiyuexiao,yuerong易yin表面吸附er损失得率。离心后用Tips轻轻吹吸几次lv膜截留的溶ye,必要时bu加一定体ji的缓冲ye冲洗膜表面,有助于减shao膜表面吸附,能提高回shou率。尽量避免Tipsjie触膜表面。

超lv离心guan是否要预处理:
     超lv离心guan通常bu需要预处理ji可使用,bu过对于蛋bai质样本处理,特别是较稀的蛋bai质溶ye来shuo(<10ug/mL),用超lv膜nong缩回shou率常常是bu定量的。sui然PES材料使非特yi吸附*xiao化,但是,腸heng┑癰ai,特别是稀的时候,会有问ti。非特yi结合的程度随着ge别蛋bai结gou的bu同erbu同。han有带电的huozhe疏水结gou域的蛋bai质更易于bu可ni结合到bu同表面。对超lv离心guan表面做钝化预处理可降低蛋bai质在膜表面的吸附性损失,大duo数情况下,在nong缩稀蛋bai溶ye之前预处理柱子可以提高回shou率,yin为溶ye可填满膜和表面暴露的空bai蛋bai吸附蝖uai恪6刍姆椒ㄊ窃ian用*高rongji的钝化溶ye预浸泡柱子1xiao时以shang,蒸馏水che底冲洗柱子,再用蒸馏水离心一次以che底除去可能残留在膜shang的钝化溶ye。注意钝化处理后别让膜干了。ru果要留待以后使用,需要加无菌蒸馏水保持膜湿润。

常用的钝化溶ye可选择:
1、1%niu血清bai蛋bai磷酸缓冲ye溶ye
2、5%十二烷基磺酸钠蒸馏水水溶ye
3、5%Tween-20非离子活性剂蒸馏水溶ye
4、5%Triton-X 蒸馏水溶ye
5、5%聚乙二chun化合wu蒸馏水溶ye
6、1%**球蛋baiIgG磷酸缓冲ye溶ye
超lv离心guanyin为需要高su离心,腸heng┒詊ian切力huo压力诱导下易bian性的bu稳定样pin可能bu太适合。另外超lv膜shang孔径是平均孔径,膜rong易堵,对于有微xiao颗粒huozhe碎片的样pin,*好能xian用较大孔径的超lvguan过lv一次,再进行下一步nong缩。

超lv离心guan是否可以zhong复使用:
     离心超lvguan通常bu能**再次性使用。由于单guan价格并bu便yi,bushao人尝试zhong复使用----经yan是用蒸馏水清洗膜表面duo次,离心一次到两次,那zhong可以反向离心的xiaoguan子可以加蒸馏水浸泡后反向duo离心一次,会好xie。可zhong复用于同一样pin,bu用时可用蒸馏水浸泡,但是要穕e?*污染。bu同样pinjiubu要混用了。有人shuo泡在20%酒jing、1N的NaOH(氢氧化钠)中,穕e钩ぞ琫r且防干,只要超lv膜侵了水,jiubu可以再让它干,但ye有人shuo会pohuai膜结gou。反正厂jia一般bu支持zhong复用。duo次zhong复使用会堵塞lv膜shang的孔径,shen至chu现louye现xiang,影响实yan结果。